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一種量子點標記的間接競爭熒光免疫檢測地塞米松的方法 |
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| 一種量子點標記的間接競爭熒光免疫檢測地塞米松的方法，屬于免疫檢測方法技術領域。本發明用于標記抗體的量子點為ＱＤ５４５，將包被原直接包被在酶標板的微孔中，加入地塞米松標準溶液或待測樣品形成抗原－抗體發光免疫復合體，用熒光酶標儀激發并檢測所形成的抗原－抗體發光免疫復合物的熒光強度，通過與標準溶液對比求出待測樣品中地塞米松的濃度。本發明不需加顯色物質就能檢測待測樣品中地塞米松的含量，即通過抗原－抗體免疫復合物的熒光強度，間接檢測待測樣品中地塞米松的濃度值，無論操作還是反應均只需一步就可完成；本方法用于標記抗體的量子點與傳統熒光相比，發射的熒光強度更強，且熒光穩定時間長。 |
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一種量子點標記的間接競爭熒光免疫檢測地塞米松的方法
一種量子點標記的間接競爭熒光免疫檢測地塞米松的方法，其特征在于：將包被原直接包被在酶標板的微孔中，加入地塞米松標準溶液或待測樣品形成抗原－抗體發光免疫復合體，用熒光酶標儀激發并檢測所形成的抗原－抗體發光免疫復合物的熒光強度，通過與標準溶液對比求出待測樣品中地塞米松的濃度； （一）用變性牛血清蛋白ｄＢＳＡ包裹發綠光的ＱＤ５４５標記抗地塞米松多克隆抗體 （１）ＢＳＡ變性：將１６．５ｍｇＢＳＡ溶于１０ｍＬ雙蒸水中，攪拌下加入０．４２ｍｇＮａＢＨ↓［４］，室溫下反應１ｈ，６０－８０℃下加熱２０ｍｉｎ分解過量的ＮａＢＨ↓［４］，ＢＳＡ變性，二硫鍵打開成－ＳＨ，控制最終的ｄＢＳＡ水溶液的濃度為５×１０↑［－５］Ｍ； （２）變性ＢＳＡ包裹量子點ｄＢＳＡ－ＱＤｓ： 將ｄＢＳＡ和量子點鏑化鉻ＣｄＴｅ按摩爾比１∶１～１∶６混合，６０－８０℃水浴加熱１５ｍｉｎ，室溫下保持兩天，使包裹完全； （３）變性ＢＳＡ包裹量子點偶聯抗體： 將０．０５６Ｍ的５μＬ １－乙基－（３－二甲基氨基丙基）碳二亞胺ＥＤＣ與０．１Ｍ的５μＬ硫代Ｎ－羥基琥珀酰亞胺ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ混合１０ｓ后，加入至２５μＬ ｄＢＳＡ－ＱＤｓ ２×１０↑［－５］Ｍ中，變性ＢＳＡ包裹的量子點活化１５ｍｉｎ，加入９．６μＬ地塞米松抗體Ａｂ ５×１０↑［－５］Ｍ，反應物摩爾比控制為：ｄＢＳＡ－ＱＤｓ∶Ａｂ∶ＥＤＣ∶ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ＝１∶１∶５６０∶１０００，室溫下反應４ｈ，得到量子點標記的地塞米松抗體，反應液中抗體的濃度為１．１５ｍｇ／ｍＬ，用０．１％明膠的含吐溫的ｐＨ７．４，０．０１Ｍ磷酸鹽緩沖液作抗體稀釋液稀釋１０００倍待用； （二）抗原的包被 用地塞米松與卵血清白蛋白偶連體作為包被原，用ｐＨ９．６，０．０５Ｍ碳酸鹽緩沖液作為包被緩沖液，用包被緩沖液將地塞米松包被原稀釋至１－２０μｇ／ｍＬ作為包被液，在酶標板的每孔中加１００μＬ包被液，４℃冰箱過夜，用含ＮａＣｌ８．５ｇ／Ｌ、ｐＨ７．２－７．４、１０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸鹽緩沖液洗三次，按２００μＬ／孔加０．１％明膠進行封閉； （三）抗原－抗體二元發光免疫復合體的形成 在封閉后的酶標板孔中加入地塞米松標準溶液或待測樣品５０μＬ，稀釋的量子點標記的地塞米松抗體５０μＬ，３７℃孵育１ｈ，抗原與地塞米松藥物競爭抗體，部分抗體與抗原形成抗原－抗體二元免疫復合物，用含ＮａＣｌ８．５ｇ／Ｌ、ｐＨ７．２－７．４、１０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸鹽緩沖液洗三次，去掉非特異性吸附； （四）定量熒光檢測用熒光酶標儀激發并檢測所形成的抗原－抗體發光免疫復合物的熒光強度，激發波長：４３０ｎｍ；發射波長：５４５ｎｍ，通過與標準溶液對比求出待測樣品中地塞米松的濃度。
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| 專利號: |
200810123521 |
| 申請日: |
2008年6月17日 |
| 公開/公告日: |
2008年11月19日 |
| 授權公告日: |
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| 申請人/專利權人: |
江南大學 |
| 國家/省市: |
江蘇(32) |
| 郵編: |
214122 |
| 發明/設計人: |
胥傳來、袁媛、陳偉、彭池方、李秋生、尹麗梅 |
| 代理人: |
時旭丹 劉品超 |
| 專利代理機構: |
無錫市專利事務所(32104) |
| 專利代理機構地址: |
江蘇省無錫市學前街168號(214001) |
| 專利類型: |
發明 |
| 公開號: |
101308145 |
| 公告日: |
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| 授權日: |
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| 公告號: |
000000000 |
| 優先權: |
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| 審批歷史: |
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| 附圖數: |
1 |
| 頁數: |
4 |
| 權利要求項數: |
1 |
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